PerkinElmer 提供两种用于体外（in vitro）, 体内（ in vivo）和离体（ex vivo）生物发光成像的荧光素酶底物：D-荧光素和腔肠素 H。D-荧光素是 Firefly 荧光素酶（如 Red-FLuc）的底物，可与我们的 Bioware Ultra 结合使用使用我们的 RediFect™ Red-FLuc 和 Red-FLuc-GFP 慢病毒颗粒转染的生物发光肿瘤细胞系或细胞，用于体外、体内或离体成像。腔肠素 H 是 Renilla 和 Gaussia 荧光素酶的底物，可用于使用我们的 RediFect Green RenLuc 慢病毒颗粒转染的细胞进行体内成像，或者当这些荧光素酶中的任何一种用作报告基因时。相应的底物对于体外、体内或离体的生物发光可视化是必需的。

在小鼠或其他小动物模型中建立表达萤火虫荧光素酶（ firefly luciferase）、海肾荧光素酶（Renilla luciferase）或高斯荧光素酶（Gaussia luciferase）的生物发光细胞系后，注射荧光素或腔肠素底物。然后，生物发光报告基因使用底物在细胞系内产生光，从而使小鼠（或其他）模型内的生物发光细胞可视化。这种发光可以使用适当的 2D 或 3D 成像仪进行可视化和测量。

背景介绍

荧光素（Luciferin）是一种在各种生物发光生物的细胞中发现的化学物质。当荧光素（Luciferin）在荧光素酶（Luciferase）和 ATP 的催化作用下被氧化时，就会产生光。由于反应依赖于 ATP，它使研究人员能够确定能量或生命的存在。荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素（Luciferin）或者脂肪醛氧化发光的一类酶的总称。荧光素酶可以从细菌,萤火虫,海星等提取出来。萤火虫荧光素（fireflyluciferase）由于发射光谱的特性，其是一种特别好的体外成像报告系统。

双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。其中荧火虫荧光素是从甲虫（Photinus pyralis）中分离得到，分子量为61kDa；而海肾（Renilla）荧光素酶则是从海肾（Renilla reniformis）中分离，分子量为36kDa。这两种酶的区别之一是他们的底物和辅因子不同：萤火虫荧光素酶需要荧光素、氧气、ATP和镁离子同时存在才能发光；而海肾荧光素酶仅需要腔肠素（coelenterazine）和氧气。萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的区别之二是发光的颜色不同：萤火虫荧光素酶产生的光颜色呈现黄绿色，波长550-570nm；而海肾荧光素酶产生蓝光，波长480nm。正是由于这两种酶的底物和发光颜色不同，所以在双报告实验中得到广泛应用。

荧光素可以以多种方式使用。它可用于各种体外测定，其中可以使用光度计或闪烁计数器监测光的产生。它还可以用于监测体内的光产生，并且可以使用 PerkinElmer 的 IVIS® 成像平台进行监测。由于荧光素可以穿透细胞膜，因此可以监测转化细胞的荧光素酶活性。

检测原理

萤火虫萤光素酶是一种胞内蛋白，大小为61KDa。在氧气、ATP和镁离子同时存在的条件下，催化底物萤火虫萤光素氧化，生成氧化萤光素，并发出黄绿色光，其最强发光波长为560nm。

海肾萤光素酶也是一种胞内蛋白，大小为36KDa。只需要氧气就可以催化腔肠素，氧化生成高能产物coelenteramide，并发出蓝光，其最强发光波长为465nm。