常见问题（FAQ）

Q1. Bambanker冻存液可以使用的最小体积是多少？

对于1*10⁶个细胞，建议使用1 mL，对于较少的细胞，您可以减少Bambanker的用量。 例如，对于5×10 ^ 5，请使用0.5 mL。

Q2. Bambanker冻存液是否包含DMSO？

除Bambanker DMSO-Free（BBF01）外，Bambanker的其他三种均包含DMSO。

Q3. 复苏培养时，我们可以在不进行细胞洗涤的情况下直接在培养基中使用解冻的细胞吗？

 是的，您不需要清洗步骤。

Q4. 可以将在Bambanker中冷冻的细胞用于提取RNA吗？

可以。 但是请注意，每个试管中的细胞数少（1*106个细胞）可能会导致分离出的RNA少。

Q5. 我们可以使用Bambanker进行PBMC的冷冻保存吗？

可以，请参阅以下最新出版物：

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/bjh.15995

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1051044319302933

PBMC冻存的一个案例：

实验方案：

i）从健康人的血液中分离出PBMC

ii）PBMC在Bambanker（标准版）中冷冻，并在-80°C和-196°C（液氮）中以1×10 ^ 6细胞/个保存12个月。 1mL Bambanker 1mL等分试样

iii）冷冻后十二个月，快速融化细胞并测量细胞数，然后使用包被抗CD3抗体的T-25培养瓶和含IL-2（700 U / mL）的培养基培养7天。在第5、6和7天测量细胞计数，并在培养的第7天进行流式细胞术。

实验结果：

在-80°C下保存12个月，回收率59.5％；存活率88.9％

储存在液氮中（-196°C）保存12个月，回收率63.9％；存活率87.3％

回收率=解冻后完整细胞数/最初冻存的细胞数；存活率=在设定的检测时间点，通过台盼蓝测定的活细胞在总细胞中所占的百分比。

Q6. 您建议如何处理特别脆弱/敏感的细胞？

冷冻技巧：冷冻敏感细胞的最佳方法是将细胞放入Bambanker（选择合适的类型）中，并在处理过程中将其保持在4°C。将它们尽可能快地放入-80°C的冰箱中24h。然后，将细胞储存在-80°C或将冷冻的细胞转移至液氮中。

解冻技巧：将小瓶放入37°C水浴中，直到内容物融化为止。然后应立即将细胞转移至大量预热的培养基中-对于最敏感的细胞类型（干细胞，原代细胞），逐滴添加以保持活力。尽管某些细胞可以通过离心沉淀，然后再用移液器轻轻重悬，然后添加到装有预热生长培养基的细胞培养瓶中，但对于大多数敏感细胞类型，将它们融化后直接移入培养瓶中的操作更为温和。第二天进行培养基更换，以除去任何残留的防冻剂。

Q7. 我们可以使用Bambanker冷冻保存整个类器官吗？

是的，Bambanker和Bambanker HRM是您的最佳选择。 两者均可提供超过70％的恢复率。 我们建议每个冷冻管使用少量类器官（低于20 mg）。 我们还建议您先将类器官在4°C的Bambanker中浸泡10分钟，然后再冷冻。 将正常Bambanker用于类器官，将Bambanker HRM用于人类临床试验或人类组织衍生的类器官。

Q8. Bambanker可以用于果蝇吗？

只要是冻存单个细胞，就没有问题。 我们没有冻存整个生物体的经验。

Q9.我可以使用Bambanker冻存受感染细胞中的病毒吗？

只要细胞保持健康，这没问题。

Q10. 我可以直接使用Bambaker而不用将其恢复室温（RT）吗？

没问题，可以直接使用。

Q11. 如何使用Bambanker提高类器官的生存率？ 我们使用20毫克的胃和结肠组织。

您可以将正常Bambanker用于动物组织。 另外，我们建议将组织细化到20毫克以下。 您也可以在冷冻之前将组织在4°C的Bambanker中浸泡10分钟。

有关更多信息，请查看以下文件：

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S009082581931212302

https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/1878-0261.12662

Q12. 为什么我使用了Bambanker来保存细胞，但是存活率依然不高？

请冻存前确保细胞处于生长对数期，并且冻存时细胞数目控制在5×105~1×107/mL冻存液。

Q13. 我们实验室已经有固定的冻存程序了，如果换了你们的Bambanker，可以还继续用原来程序降温的方法冻存吗？

虽然本产品可以无需程序降温冻存细胞，但如果通过程序降温盒等适当控制了温度下降的速度，效果更佳（如虎添翼）。

Q14. 哪些细胞株（系）适合使用Bambanker来进行细胞冷冻保存？

几乎所有细胞株（系）都可以使用Bambanker进行冻存。对于较为宝贵的ES/iPS细胞的保存尤其适用。官网上所列举的细胞系均已经过测试验证。

但也并不排除可能有某些细胞株是不适合使用Bambanker来进行冻存的，用户在没有确认是否可使用时，建议在进行正式细胞冻存之前先进行预实验。

Q15. 无血清冻存液相比传统含血清冻存液有什么优势？

无血清冻存液因不含有动物血清，质量更稳定，批间差更小；同时未知生物成分或感染性物质污染细胞的几率也极低，尤其对于ES/iPS细胞等有可能用于再生医疗的细胞安全得以严格保障；可以直接冻存无血清培养的细胞，免去无血清再驯化的步骤；另外Bambanker无血清细胞冻存液不需要像传统的血清冻存液那样需要程序降温，减少了用户的繁琐操作，节省了时间。

Q16. Bambanker在冷冻保存细胞的过程中起什么作用？

无血清细胞冻存液使用了DMSO（DMSO-Free除外）等作为保护剂，在冻存细胞时能以1℃/min左右的温度下降而逐渐冻存，在此过程中，细胞内的水分子被置换成保护剂，抑制胞内和细胞周边的冰晶的形成，防止细胞膜和细胞器结构损伤，防止蛋白变性。

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